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2021-07-29

研究人員發(fā)現(xiàn),盡管大腦通過中腦產(chǎn)生5-羥色胺的神經(jīng)元來調(diào)節(jié)快感和饑餓感的進(jìn)食,但每種進(jìn)食方式都是由自己獨立的電路連接的,不影響其他類型的進(jìn)食方式。美國疾病控制與預(yù)防中心(CentersforDiseaseControlandPrevention)的數(shù)據(jù)顯示,無論是由饑餓還是愉悅引起的暴飲暴食,通常都會導(dǎo)致肥胖。美國約42%的成年人都患有肥胖癥。一個由貝勒醫(yī)學(xué)院(BaylorCollegeofMedicine)的研究人員領(lǐng)導(dǎo)的國際研究小組在動物模型上研究了大腦是如何調(diào)節(jié)饑餓或其...

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2021-07-29

基本原理:外源目的DNA與載體分子的連接稱為DNA重組,重組的DNA稱為重組體或重組子。研究中需要克隆或表達(dá)的基因為外源DNA,載體是指能夠攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞,并在其中進(jìn)行擴(kuò)增或誘導(dǎo)外源基因表達(dá)的工具,其中質(zhì)粒載體最為常用。質(zhì)粒是獨立于細(xì)菌染色體外具有自我復(fù)制的DNA分子。所有的質(zhì)粒都有復(fù)制子、選擇性標(biāo)志和多克隆位點3個共同的特性。質(zhì)粒載體的選擇包括載體的大小、載體拷貝數(shù)、多接頭以及篩選插入片段的能力,pcDNA3.1(+/-)是比較常用的真核表達(dá)載體?;静襟E:1、目...

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2021-07-29

CCK8全稱CellCountingKit-8,是一種基于WST-8(化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測試劑盒。其工作原理類似于MTT,在電子耦合試劑存在的情況下,WST-8可以被線粒體內(nèi)的脫氧酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)。CCK8法在藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性實驗、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢...

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2021-07-28

基本原理細(xì)胞凍存時保存細(xì)胞的最基本方法,當(dāng)不加保護(hù)劑直接凍存細(xì)胞時,細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水會形成冰晶,從而引起細(xì)胞死亡。因此,正常情況下凍存細(xì)胞,通常會向培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑,使用逐步降低溫度的方法,以減少凍存過程中細(xì)胞內(nèi)冰晶形成、保護(hù)細(xì)胞。注意事項1、凍存細(xì)胞選擇細(xì)胞增殖旺盛、情況穩(wěn)定、無污染、處于對數(shù)生長期的細(xì)胞。2、實驗操作過程必須遵循無菌操作。3、細(xì)胞凍存液的配方應(yīng)根據(jù)細(xì)胞的類型進(jìn)行調(diào)整,摸索對應(yīng)細(xì)胞最適的配方。4、細(xì)胞凍存過程,降溫速率要小,遵循慢凍原則,可借助程序降溫...

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2021-07-27

41、跑電泳的時候配的膠總是“縮”是什么原因呢?是有的成分不對嗎?答:沒什么問題,就是你膠里的水分被蒸發(fā)了。過夜時拿保鮮膜包起來,在里面加點水保持濕度就可以了;也可能母液(30%聚丙酰胺)有問題,你可以重新配制一份觀察;能夠替換的試劑,盡量換一下,選用好的試劑。42、蛋白質(zhì)的分子量跨度很大,如要分離小21KD,中至66KD,大至170KD,可以一次做好嗎?答:這么廣的分布不好轉(zhuǎn)移,一般建議:21kd和66kd可以一起轉(zhuǎn),12%SDS-PAGE,濕轉(zhuǎn)120mA,45-60min...

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2021-07-27

Westernblot實驗過程中常見問題匯總及處理方案。21、想分離的蛋白是分子量200kd的,SDS-PAGE電泳的分離膠濃度多大合適?濃縮膠的濃度又該用多少?這么大分子量的蛋白容易作WesternBlot嗎?答:分離膠用7%,濃縮膠3.5%,200kd的蛋白不好做。22、如果上樣量超載,要用什么方法來增加上樣量?答:可以濃縮樣品,也可以根據(jù)你的目標(biāo)分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地,超載30%是不會有問題的。如果已經(jīng)超了不少了,而且小分子量的也要,可以考慮加大膠的厚度,...

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