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2021-08-13
分子成像的發(fā)展：1999年，美國(guó)哈佛大學(xué)Weissleder等人提出了分子影像學(xué)（molecularimaging）的概念——應(yīng)用影像學(xué)方法，對(duì)活體狀態(tài)下的生物過(guò)程進(jìn)行細(xì)胞和分子水平的定性和定量研究。傳統(tǒng)成像大多依賴(lài)于肉眼可見(jiàn)的身體、生理和代謝過(guò)程在疾病狀態(tài)下的變化，而不是了解疾病的特異性分子事件；分子成像則是利用特異性分子探針追蹤靶目標(biāo)并成像。這種從非特異性成像到特異性成像的變化，為疾病生物學(xué)、疾病早期檢測(cè)、定性、評(píng)估和治療帶來(lái)了重大的影響。分子成像技術(shù)使活體動(dòng)物體內(nèi)成像成...2021-08-12
提取質(zhì)粒DNA的方法有很多種，從提取產(chǎn)量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取，從具體操作方法分可以分為堿裂解法、煮沸法等，各種不同的方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康目梢圆捎煤线m的提取方法。堿裂解法：使用堿與SDS裂解法從E.coli（大腸桿菌）中分離制備質(zhì)粒DNA已有30多年的歷史。將細(xì)菌懸浮液暴露于高pH值的強(qiáng)陰離子洗滌劑中，會(huì)使細(xì)胞壁破裂，染色體DNA和蛋白質(zhì)變性，將質(zhì)粒DNA釋放到上清中。堿性溶劑使堿基配對(duì)*破壞，閉環(huán)...2021-08-12
RNA免疫共沉淀（RNAimmunoprecipitation，RIP）是一種基于抗體的技術(shù)，用于定位體內(nèi)的RNA-蛋白質(zhì)相互作用。將所關(guān)注的RNA結(jié)合蛋白(RBP)與其結(jié)合的RNA一起進(jìn)行免疫沉淀，鑒定結(jié)合轉(zhuǎn)錄RNA（mRNA、非編碼RNA或病毒RNA），可以通過(guò)實(shí)時(shí)PCR、微陣列或測(cè)序檢測(cè)。表觀遺傳學(xué)和RNA生物學(xué)領(lǐng)域?qū)Σ煌琑NA作用和功能的關(guān)注大大增加。據(jù)觀察，RNA的功能遠(yuǎn)不止轉(zhuǎn)錄和后續(xù)的翻譯。例如，RNA-蛋白質(zhì)相互作用能夠調(diào)控mRNA和非編碼RNA的功能。對(duì)RNA...2021-08-11
細(xì)胞凋亡（apoptosis）指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過(guò)程，而是主動(dòng)過(guò)程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理?xiàng)l件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過(guò)程。下面介紹幾種常用的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法。一、TUNEL法脫氧核糖核苷酸衍生物digoxin在TdT酶的作用下，可以摻入到凋亡細(xì)胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端，與dATP形成異多聚體，并可與連接了...2021-08-11
細(xì)胞周期（cellcycle）是指細(xì)胞從一次分裂完成開(kāi)始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過(guò)程，分為間期與分裂期兩個(gè)階段。間期又分為三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。細(xì)胞分裂期又稱(chēng)M期。細(xì)胞通過(guò)M期一分為二，有的可繼續(xù)分裂進(jìn)行周期循環(huán)，有的轉(zhuǎn)入G0期。G0期是脫離細(xì)胞周期暫時(shí)停止分裂的一個(gè)階段。但在一定適宜刺激下，又可進(jìn)入周期（圖1），合成DNA與分裂。G0期的特點(diǎn)為：在未受刺激的G0細(xì)胞，DNA合成與細(xì)胞分裂的潛力仍然存在；當(dāng)G0細(xì)胞...2021-08-02
1、樣本準(zhǔn)備過(guò)程中防止蛋白質(zhì)降解和保留翻譯后修飾樣本準(zhǔn)備過(guò)程中，細(xì)胞會(huì)釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶，為了減少這些酶的活性，處理樣本的過(guò)程應(yīng)在冰上進(jìn)行，并預(yù)先冷卻所有緩沖液，并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇選擇磷酸化特異性抗體時(shí)，選擇所要檢測(cè)位點(diǎn)的磷酸化抗體至關(guān)重要。磷酸化都會(huì)使蛋白質(zhì)的分子量增加80Da，檢查抗體是否檢測(cè)到磷酸化靶蛋白的分子量正確的條帶也很重要。3、誘導(dǎo)磷酸化課題設(shè)計(jì)可能需要在收獲前刺激細(xì)胞，以確保蛋白質(zhì)被磷酸化。例如，在...2021-08-02
蛋白轉(zhuǎn)印的方法蛋白轉(zhuǎn)印可選擇傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)、半干轉(zhuǎn)或快速半干轉(zhuǎn)方法。濕轉(zhuǎn)系統(tǒng)：適用于大多數(shù)各種分子量的常規(guī)蛋白轉(zhuǎn)印。轉(zhuǎn)印過(guò)程中凝膠和膜被浸入充滿轉(zhuǎn)印緩沖液的槽中。半干轉(zhuǎn)系統(tǒng)：凝膠和膜被夾在預(yù)先潤(rùn)濕緩沖液的濾紙之間，濾紙與平板電極直接接觸。半干轉(zhuǎn)系統(tǒng)的安裝使用比濕轉(zhuǎn)簡(jiǎn)單?？焖俎D(zhuǎn)印系統(tǒng)：快速轉(zhuǎn)印系統(tǒng)是最近發(fā)展出來(lái)的技術(shù)，使用專(zhuān)用設(shè)備、專(zhuān)用濾紙及專(zhuān)用緩沖液來(lái)快速有效地轉(zhuǎn)印蛋白。通常濾紙和濕潤(rùn)的膜預(yù)先放在一次性包裝中，簡(jiǎn)化了轉(zhuǎn)印“三明治”的組裝。轉(zhuǎn)印緩沖液轉(zhuǎn)印緩沖液包含強(qiáng)導(dǎo)電性化學(xué)緩沖試劑...- 移液器
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